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本制品是采用SYBR Green嵌合荧光法进行qRT-PCR的专用试剂。采用HotStart Taq DNA聚合酶并结合特别配方的反应缓冲液，能有效抑制非特异性反应，提高了反应特异性，能够在更广的范围内进行准确定量。

本试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，cDNA合成和PCR反应在一个管中进行，反转录结束后可直接进行PCR循环而不用增加额外的步骤。本制品配有不同浓度的ROX Reference Dye，用于不同仪器校正孔间荧光信号误差。

• 高特异性：采用特殊工艺制造的HotStart Taq DNA聚合酶，可以进行热启动法PCR反应，大大提高了PCR扩增的特异性。
  
• 高效：精心配制的qRT-PCR专用2×SuperMix，具有高效合成能力，高扩增效率和灵敏度。

• 保存：原则上-20℃遮光保存。如果持续使用，可在4℃内进行短期保存，但此时须遮光，建议使用遮光箱或用添附的铝袋进行保存。
  
• 使用：请上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免污染。建议反应体积为20～50μL。

• 用ROX I校准的Real Time PCR仪有：
  ABI:5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast/StepOne/StepOnePlus及其他仪器。
  
• 用ROX II校准的Real Time PCR仪有：
  ABI:7500/7500 Fast/ViiA7/QuantStudio 3,5,6 Flex,7 Flex12k Flex;Stratagene:MX4000/MX3500P/MX3000P及其他仪器。
  
• 不需要用ROX校准的Real Time PCR仪有：
  Bio-Rad:CFX96/CFX 384/iCycler iQ/iQ5/MyiQ/MiniOpticon/Opticon/Opticon2/Chromo4；
  Eppendorf:MasterCycler ep realplex/realplex 2s；
  Cepheid:SmartCycler；
  Illumina:Eco qPCR；
  Roche Applied Science:LightCycler480/LightCycler2.0/Lightcycler96；
  Thermo Scientific:PikoReal Cycler；
  Qiagen:Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。

• 常用反应体系
  

  成分	用量
  2×SYBR One-Step qRT-PCR SuperMix	10μL
  BalbScript RT Enzyme Mix	1μL
  上游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  下游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  RNA模板	1～2μL
  RNase-Free Water	至20μL

• 常用PCR反应程序
  
  • 两步法：
    

    反应阶段	循环数	温度	时间
    反转录	1	42℃	5min
    预变性	1	94℃	5min
    变性	40	95℃	15s
    退火/延伸		60℃	1min
    终延伸	1	72℃	5min
    熔解曲线	1	60～95℃	-

  • 三步法：
    

    反应阶段	循环数	温度	时间
    反转录	1	42℃	5min
    预变性	1	94℃	5min
    变性	40	95℃	15s
    退火		50～60℃	20s
    延伸		72℃	30s
    终延伸	1	72℃	5min
    熔解曲线	1	60～95℃	-